一(yī)，色譜(pǔ)—質(zhì)譜分(fēn)析(xī)方法
典型的(dí)二惡(è)英類(lèi)化合(hé)物分析過程包括(kuò)樣品采集，提(tí)取，純(chún)化(huà)和(hé)富(fù)集(jí)，氣相色譜(pǔ)—質譜(pǔ) (GC—MS) 分析和數(shù)據(jù)處理(lǐ)。國內的(dí)主(zhǔ)要分(fēn)析方法是(shì)以美(měi)國 EPA1613 方法及(jí)日(rì)本工(gōng)業標準(zhǔn) JISK0311—1999 為(wéi)基礎相繼(jì)建(jiàn)立(lì)起來(lái)的(dí)。自中(zhōng)國(guó)環保(bǎo)行業(yè)標(biāo)準 HJ/T77 實施後(hòu)，主(zhǔ)要依(yī)據此標(biāo)準進行(háng)二(èr)惡(è)英(yīng)類物(wù)質(zhì)分析研究(jiū)，但各(gè)實驗室也會(huì)在各(gè)實驗條件下，對不(bù)同(tóng)相樣品的分析(xī)過(guò)程(chéng)進(jìn)行(háng)優化，實現(xiàn)效率(shuài)和檢(jiǎn)測(cè)水(shuǐ)平(píng)的(dí)提(tí)高(gāo)。
國家標準(zhǔn)規定的方(fāng)法是同(tóng)位素(sù)稀釋(shì)高分辨氣相色(sè)譜(pǔ)—高分辨(biàn)質(zhì)譜法 (HRGC—HRMS)。用色譜法檢(jiǎn)測(cè)二惡(è)英類(lèi)化合(hé)物首(shǒu)先(xiān)需進(jìn)行(háng)樣本(běn)中待分析(xī)物的提取和純(chún)化，這是由於分(fēn)析物(wù)在樣本(běn)中(zhōng)含量低(dī) (ppt級(jí))，超(chāo)痕(hén)量(liáng)分(fēn)析(xī)很(hěn)容(róng)易受(shòu)基質中(zhōng)其它(tā)成(chéng)分(fēn)的(dí)影響。然後用色(sè)譜柱(zhù)分離，並(bìng)與(yǔ)檢(jiǎn)測(cè)器(qì)聯用進(jìn)行(háng)定(dìng)性，定量。由於(yú)質譜(pǔ)具有(yǒu)高(gāo)精(jīng)度(dù)的(dí)分析檢(jiǎn)測能力，目前多選(xuǎn)擇與質譜檢測器(qì)聯用。
典(diǎn)型(xíng)的二(èr)惡(è)英類分析過程如(rú)下(xià)：
1.樣品(pǐn)采(cǎi)集及富集(jí)
國家環(huán)境(jìng)分析測試(shì)中(zhōng)心(xīn)，廣(guǎng)州地球化學(xué)研(yán)究所及(jí)中(zhōng)國科學(xué)院生(shēng)態環境研究中(zhōng)心(xīn)等(děng)單位(wèi)已(yǐ)有(yǒu)研究(jiū)對我(wǒ)國焚(fén)燒(shāo)設施(shī)產生(shēng)的飛(fēi)灰，大氣(qì)環(huán)境(jìng)樣品中的(dí)二(èr)惡英(yīng)類物質進行分(fēn)析(xī)，采(cǎi)樣方法(fǎ)主要是用(yòng)大流量采樣器濾膜收集，智能(néng)大(dà)流(liú)量(liáng)TSP采樣(yàng)器及玻(bō)璃(lí)纖維(wéi)膜(GFF) 一(yī)吸附(fù)載體(tǐ)(聚(jù)亞胺(àn)脂(zhī)泡(pào)沫， PUF)係統(tǒng)采(cǎi)集(jí)方法等(děng)。
2.二(èr)惡英(yīng)提(tí)取
提(tí)取(qǔ)的目(mù)的(dí)在於(yú)使二惡英(yīng)與(yǔ)原基(jī)質(zhì)分離(lí)，而萃取進(jìn)入(rù)用(yòng)於抽(chōu)提(tí)的(dí)溶(róng)劑中。該(gāi)步驟對(duì)於(yú)檢(jiǎn)測(cè)的(dí)重現(xiàn)性至(zhì)關重(zhòng)要(yào)，主(zhǔ)要是溶(róng)劑(jì)的選(xuǎn)擇(zé)和提取方(fāng)法(fǎ)的(dí)選擇(zé)，且不(bù)同的(dí)樣本需(xū)采(cǎi)用不同的提取(qǔ)方法(fǎ)。
對於飛(fēi)灰，土壤(rǎng)，灰塵(chén)，沉積物等樣品，采用(yòng)的溶劑(jì)是甲(jiǎ)苯(běn)，二氯(lǜ)甲(jiǎ)烷(wán)，二氯(lǜ)甲(jiǎ)烷(wán)和丙酮混合(hé)液(yè)(1:1體(tǐ)積比)等(děng)。對生物(wù)樣(yàng)本(běn)一般(bān)是(shì)在(zài)冰凍後與(yǔ)無(wú)水*共同研磨去除(chú)水分(fēn)，然後再(zài)采用合(hé)適(shì)的溶(róng)劑(jì)提取(qǔ)，采用的溶(róng)劑主要是(shì)1:1二(èr)氯甲(jiǎ)烷：己烷(分析(xī)純)，1:1的(dí)二(èr)氯(lǜ)甲烷：正己烷，甲(jiǎ)苯，丙(bǐng)酮等(děng)。血樣提(tí)取(qǔ)前常(cháng)添加(jiā)乙醇(chún)和硫(liú)酸銨飽和(hé)溶液(yè)，然後(hòu)再抽提。奶(nǎi)樣則先用(yòng)甲酸(suān)處理。對空氣樣本在(zài)采樣後(hòu)，用以下有(yǒu)機溶(róng)劑進(jìn)行洗脫(tuō)抽(chōu)提(tí)，主要為：丙(bǐng)酮(tóng)，甲苯(běn)，二氯甲(jiǎ)烷。
目(mù)前(qián)用(yòng)於二惡英樣品提取(qǔ)的(dí)方(fāng)法主(zhǔ)要(yào)是(shì)索式(shì)提(tí)取法(fǎ)。近年來出(chū)現了一些替代(dài)的提取新(xīn)技術，如超聲萃(cuì)取(qǔ)法，超臨界(jiè)流體萃(cuì)取(qǔ)(SFE)，加(jiā)速溶(róng)劑(jì)萃取(qǔ)(ASE)，微波提取(qǔ)等。這些(xiē)新方(fāng)法縮(suō)短(duǎn)了提取時(shí)間，大(dà)大減(jiǎn)少了有毒(dú)有(yǒu)機溶劑的(dí)使用量。隨著(zhuó)實驗室(shì)水平(píng)的不斷提前(qián)，ASE技術將取(qǔ)代(dài)索(suǒ)式提取(qǔ)法用於(yú)對(duì)土壤，沉積物以及生物組織的研究分析(xī)。
3.二惡英純化(huà)
用(yòng)於(yú)純化的方法主要有：液(yè)一(yī)液分(fēn)配，濃(nóng)硫酸磺化(huà)，鹼(jiǎn)解(jiě)，氧(yǎng)化(huà)，柱層析(包括凝(níng)膠(jiāo)色(sè)譜和液相色譜)。其(qí)中，采用幾(jī)根層(céng)析(xī)柱(zhù)串聯(lián)或多種(zhǒng)填料填(tián)充(chōng)柱層析(xī)法是較為(wéi)通(tōng)用的方法，當前(qián)主要(yào)采用(yòng)二種方(fāng)法(fǎ)相(xiāng)結(jié)合(hé)的(dí)方式(shì)，即(jí)采(cǎi)用(yòng)幾根(gēn)多種填料的層析柱(zhù)對樣品(pǐn)進行純化預(yù)處(chǔ)理。常(cháng)用(yòng)的(dí)吸附(fù)劑(jì)有(yǒu)矽(guī)酸鹽(yán)類吸附劑(jì)，佛羅裏(lǐ)土(tǔ)，氧化(huà)鋁(lǚ)，活性(xìng)炭等。
當(dāng)前(qián)用(yòng)於二惡(è)英(yīng)純化(huà)的技術有(yǒu)二種，即手工和自動純化技(jì)術。手工純化技(jì)術(shù)主(zhǔ)要(yào)是采(cǎi)用幾(jī)根填(tián)充有不同吸附劑的(dí)層析柱對環(huán)境(jìng)樣品進行(háng)純(chún)化。國內普(pǔ)遍(biàn)使用(yòng)的(dí)是國(guó)家(jiā)標(biāo)準中(zhōng)采(cǎi)用的技術，由三根層析柱所組(zǔ)成，即多層(céng)酸(suān)化矽(guī)膠柱(zhù)，氧化鋁和佛(fó)羅(luó)裏(lǐ)土柱，用(yòng)不(bù)同(tóng)配比的正(zhèng)己(jǐ)烷(wán)和(hé)二氯甲烷(wán)溶劑(jì)進行洗(xǐ)脫，收集(jí)洗脫液(yè)，濃縮分(fēn)析。而國外開(kāi)發(fā)的(dí)自(zì)動純(chún)化(huà)技(jì)術也(yě)開始進(jìn)入(rù)我國(guó)實驗室(shì)，主(zhǔ)要以(yǐ)PGC-PLC，FMS PowerPrep係(xì)統發(fā)展較(jiào)為成(chéng)熟(shú)[6]。
4.二(èr)惡(è)英(yīng)檢測
二(èr)惡英類(lèi)化合物(wù)的(dí)測定方法有：液相色(sè)譜，薄(báo)層(céng)色譜和氣(qì)相色譜(pǔ)，其中氣(qì)相色譜(pǔ)技術(shù)遠(yuǎn)優(yōu)於另外兩者(zhě)。由於(yú)檢(jiǎn)測限的原因，目前(qián)主要(yào)使(shǐ)用(yòng)的檢測(cè)器是(shì)質譜儀，電子俘獲檢測(cè)器也有一(yī)定的應用。使(shǐ)用(yòng)的質(zhì)譜儀(yí)電離方(fāng)式(shì)主要使用EI。目(mù)前(qián)串聯(lián)質(zhì)譜也得(dé)到了(liǎo)應(yīng)用(yòng)，它(tā)與(yǔ)高(gāo)分(fēn)辨(biàn)率(shuài)質譜儀比(bǐ)較(jiào)，有更(gēng)好的選(xuǎn)擇(zé)性(xìng)。大量(liáng)研究(jiū)表明(míng)，分辨(biàn)氣相(xiāng)色(sè)譜一(yī)高分辨質(zhì)譜(pǔ)法在我國(guó)的運(yùn)用水平已經相(xiāng)對成熟。
5.二惡(è)英定(dìng)性與定量
二(èr)惡英(yīng)類化合物的(dí)定性(xìng)可(kě)根據與標準物質(zhì)保留時間(jiān)比較。一種方(fāng)法是在(zài)相(xiāng)同條件下，標準物質與待測物質分別進樣比較保(bǎo)留(liú)時間；另一種方(fāng)法(fǎ)是(shì)標準(zhǔn)物(wù)質和待測物質共(gòng)同進樣(yàng)，根據峰高(gāo)的增(zēng)加而定(dìng)性。目前依靠(kào)質(zhì)譜定性是使(shǐ)用(yòng)越(yuè)來(lái)越多的方(fāng)法。二惡英(yīng)的(dí)定(dìng)量采用TEQ定(dìng)量法。目前(qián)較多的(dí)是以同(tóng)位素為內(nèi)標(biāo)來(lái)定量，以(yǐ)同位素(sù)為內標(biāo)定量(liáng)準(zhǔn)確，可對分析各步(bù)進(jìn)行評(píng)價和(hé)控(kòng)製(zhì)，進行(háng)質量控(kòng)製。
二(èr)，其(qí)它方法
二惡(è)英生物測試(shì)法(fǎ)有(yǒu)EROD(7一乙氧基一(yī)異吩一嗯唑(zuò)酮一脫(tuō)乙(yǐ)基(jī)酶)細胞培養法(fǎ)，螢光素酶方法，酶免疫(yì)方法 (Enzyme Immuno Assay，EIA) 和熒(yíng)光免疫法 (DELFIA)等，通過對從(cóng)受體活化程(chéng)度的測定來(lái)間接(jiē)表達(dá)二惡英(yīng)的(dí)TEQ。
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